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內(nèi)參actin（內(nèi)參actin和gapdh）

發(fā)布時間：2023-04-19 04:33:11 稿源：創(chuàng)意嶺閱讀： 74

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本文目錄:

1、western blot內(nèi)參抗體actin為什么出了好幾條帶
2、RT-PCR是，內(nèi)參是什么時候加入，作用是什么？謝謝
3、求助水稻的actin 內(nèi)參基因引物
4、請問內(nèi)參β-actin在血細(xì)胞里面也有表達(dá)嗎？特別是紅細(xì)胞，里面有嗎？

內(nèi)參actin（內(nèi)參actin和gapdh）

一、western blot內(nèi)參抗體actin為什么出了好幾條帶

首先要確定你的樣品沒有降解，基本上看帶型可以確定，條帶要干凈，沒有拖尾，其次是你的一抗，這個需要跟別個同學(xué)做的對比，這兩個問題排除后主要就是你的抗體稀釋度了，濃度過高，顯影底物過強都會出現(xiàn)雜帶，而雜帶跟你每次操作包括洗脫的時間孵育的時間的不同，都可能出現(xiàn)在不同的位置

二、RT-PCR是，內(nèi)參是什么時候加入，作用是什么？謝謝

你說的應(yīng)該是real

time

pcr吧，注意rt其實是逆轉(zhuǎn)錄reverse

transcription的縮寫，和real

time一定要分開來。

常說的qpcr，qrt-pcr，都是通過實時（real

time）的方法，測定樣品中某個模版的起始量ct值

但是呢，由于之前rna提取、反轉(zhuǎn)等步驟，各個步驟存在不同的效率，ct值并無法真實反應(yīng)樣品中模版的絕對量，因此，需要一個內(nèi)參來做為參考。

比方說，a基因的ct值，在a樣品中是18，在b樣品中是20，由于a

b樣品存在rna質(zhì)量等等一系列不同，你無法直接就判斷這個基因在a樣品中的表達(dá)量是b樣品的4倍。

這時候，我們需要一個內(nèi)參，假如內(nèi)參ct值在a樣品中是14，而在b樣品中是15。由于內(nèi)參的穩(wěn)定性，在不同樣品中被認(rèn)為是表達(dá)量一致的，因此，a基因的在ab樣品之間的-δδct值是1，也就是表達(dá)量為2倍的關(guān)系。

這里，我們可以知道內(nèi)參的作用，即通過測量內(nèi)參，可以在后面分析過程中將不同樣品的起始量均一化。內(nèi)參需要選擇在不同樣品中有穩(wěn)定表達(dá)量的基因，這就是為什么內(nèi)參經(jīng)常選擇看家基因的原因。以小鼠為例，常用的內(nèi)參有actin

gapdh

hprt等等。

當(dāng)然，現(xiàn)在的很多觀點認(rèn)為這些基因在不同組織中豐度也不同，例如gapdh，在線粒體含量高的組織中豐度高，很多人認(rèn)為用基因組dna做內(nèi)參會更加靠譜，當(dāng)然這是后話了，選擇gapdh無礙于現(xiàn)階段的實驗，如果覺得不靠譜，可以選擇兩個內(nèi)參。

你所研究的物種，應(yīng)該有人已經(jīng)發(fā)表過相應(yīng)的內(nèi)參，直接上數(shù)據(jù)庫搜就可以了。

原創(chuàng)內(nèi)容，碼字不易，萬望采納。

三、求助水稻的actin 內(nèi)參基因引物

ACTIN在研究中被發(fā)現(xiàn)最不穩(wěn)定引物為：

Forward GAAGATCACTGCCTTGCTCC

Reverse CGATAACAGCTCCTCTTGGC

其他較好的水稻內(nèi)參基因為：

18S rRNA

Forward ATGATAACTCGACGGATCGC

Reverse CTTGGATGTGGTAGCCGTTT

Glyceraldehyde-3-hosphate dehydrogenase

Forward GGGCTGCTAGCTTCAACATC