脫色搖床（脫色搖床親親）

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本文目錄:

• 1、凝膠脫色不徹底的原因

• 2、脫色離心工資如何

• 3、中國(guó)古代的科學(xué)儀器有哪些?

• 4、MTT法測(cè)24孔板時(shí) 細(xì)胞數(shù)多 二甲基亞砜（DMSO）溶解甲瓚后溶液顏色深的孔 吸光度反而低

一、凝膠脫色不徹底的原因

變性劑已揮發(fā)。

因?yàn)樽冃詣┮褤]發(fā)，起不到變性作用，可在LondingBuffer重加巰基乙醇或重配，降低凝膠濃度。所以凝膠脫色不徹底的原因是變性劑已揮發(fā)。

脫色的時(shí)候在脫色液里加入豆制品，比如豆皮，微波爐加熱后，放在搖床上搖，可以達(dá)到快速脫色的目的。

二、脫色離心工資如何

高。海門市其林貝爾儀器制造有限公司是生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)儀器及醫(yī)用塑料制品專業(yè)工廠，產(chǎn)品有脫色搖床、萬向搖床、高速分散器、紫外設(shè)備、振蕩器、離心機(jī)、混合器等，員工工資高，待遇好，安全可靠。

三、中國(guó)古代的科學(xué)儀器有哪些?

【生命科學(xué)】電泳儀/電泳槽 細(xì)胞樣品收集器 自動(dòng)部分收集器/自動(dòng)樣品采樣儀 PCR擴(kuò)增儀/PCR熱循環(huán)儀 紫外檢測(cè)儀/紫外分析儀 液氮生物容器(液氮罐) 冷凍干燥機(jī)(凍干機(jī)) 干式恒溫器/恒溫混勻儀 血紅蛋白儀 核酸蛋白儀/酶標(biāo)儀/生化分析儀 雪花制冰機(jī) 組織芯片制備儀/細(xì)胞程控降溫儀 動(dòng)物人工呼吸機(jī)/溶劑過濾器 層析柱 微波化學(xué)反應(yīng)器 移液器/移液槍/分液器 微孔板恒溫孵育器 氮?dú)獯祾邇x

【光學(xué)儀器】可見分光光度計(jì) 紫外可見分光光度計(jì) 熒光分光光度計(jì) 紅外分光光度計(jì) 原子吸收分光光度計(jì) 光澤度儀(計(jì)) 旋光儀/圓盤旋光儀 火焰光度計(jì) 白度測(cè)定儀(白度計(jì)) 測(cè)色儀/色差儀/羅維朋比色計(jì) 應(yīng)力儀 熔點(diǎn)測(cè)定儀/熔點(diǎn)儀 照度計(jì)/日照計(jì)/測(cè)光儀 紫外輻照計(jì) 光度計(jì)/光強(qiáng)計(jì)/亮度計(jì) 光電霧度計(jì)/透光率霧度測(cè)定儀 阿貝折射儀/棱鏡折射儀

【箱類器材】真空干燥箱 鼓風(fēng)干燥箱 電熱恒溫干燥箱 遠(yuǎn)紅外干燥箱(烘箱) 膠片干燥箱 精密節(jié)能干燥箱 霉菌培養(yǎng)箱 振蕩培養(yǎng)箱 隔水式培養(yǎng)箱 電熱恒溫培養(yǎng)箱 光照培養(yǎng)箱 生化培養(yǎng)箱 人工氣候箱(培養(yǎng)箱) 恒溫恒濕箱 高低溫試驗(yàn)箱(濕熱試驗(yàn)箱) 鹽霧試驗(yàn)箱 二氧化碳培養(yǎng)箱(CO2) 植物培養(yǎng)箱/植物生長(zhǎng)箱 老化試驗(yàn)箱 真空手套箱(惰性氣體操作箱) 電熱恒溫水箱 高溫?zé)Y(jié)箱 定碳爐 低溫冷阱/半導(dǎo)體冷阱

【溫控儀表】電熱板/加熱板/控溫板 電熱套/加熱套/控溫套 箱式電阻爐(馬弗爐) 管式電阻爐/管式高溫爐 坩堝電阻爐/坩堝電爐 單管定碳爐/雙管定碳爐 封閉電爐/萬用電爐 恒溫水(油)浴/恒溫水槽 恒溫水浴鍋 低溫恒溫槽/低溫恒溫浴 控溫儀/溫控儀/溫度控制儀 電砂浴/電沙浴

【無損檢測(cè)】轉(zhuǎn)速表/頻閃儀 測(cè)振儀(振動(dòng)監(jiān)測(cè)儀/變送器) 機(jī)械故障檢測(cè)儀/機(jī)械故障聽診器 地下管道/管線探測(cè)檢漏儀 麥?zhǔn)秸婵沼?jì)/壓力真空計(jì)/熱偶計(jì)/電阻計(jì)/復(fù)合計(jì) 泄漏檢測(cè)儀 電火花檢漏儀/電火花針孔檢測(cè)儀 現(xiàn)場(chǎng)動(dòng)平衡儀 洗片機(jī)/觀片燈 超聲探傷儀 磁粉探傷儀 X射線探傷機(jī) 其它無損檢測(cè)設(shè)備 焊縫外觀檢測(cè)工具箱 表面粗糙度測(cè)量?jī)x 紅外測(cè)溫儀 看譜鏡(驗(yàn)鋼鏡) 黑白密度計(jì) 油質(zhì)分析儀

【量具量?jī)x】數(shù)顯卡尺 游標(biāo)卡尺 帶表卡尺 千分表/百分表 千分尺 高度尺/深度尺 數(shù)顯萬能角度尺 扭矩測(cè)量?jī)x/扭力測(cè)試儀 卡表/卡規(guī) 數(shù)顯標(biāo)尺 管形測(cè)力計(jì)/管形拉力計(jì)/管形推力計(jì) 推拉測(cè)力計(jì)/拉壓測(cè)力計(jì)/拉力計(jì)

【除濕凈化】除濕機(jī)/抽濕機(jī)/吸濕機(jī) 超聲波清洗器 空氣凈化器 自動(dòng)蒸餾水器/電熱蒸餾水器 滅菌器/蒸汽消毒器 臭氧消毒機(jī) 超凈工作臺(tái) 消毒殺菌凈手器 電動(dòng)氣溶膠噴霧器 純水機(jī)/超純水機(jī) 防潮柜/防潮箱/氮?dú)夤?不銹鋼存尸冷藏柜

【常規(guī)設(shè)備】電動(dòng)攪拌機(jī) 磁力攪拌器 研磨機(jī)/球磨機(jī)/沙磨機(jī)/平磨機(jī) 勻漿機(jī)/分散機(jī)/均質(zhì)機(jī)/搗碎機(jī) 萬能粉碎機(jī)/中藥粉碎機(jī)/破碎機(jī) 錐形磨/膠體磨 恒溫?fù)u床/脫色搖床/搖瓶柜 振蕩器/恒溫振蕩器 旋渦混合器/梯度混合器 空氣壓縮機(jī)/無油空壓機(jī) 粉末壓片機(jī)(油壓機(jī))/模具 切割機(jī)/鑲嵌機(jī) 拋光機(jī)/預(yù)磨機(jī)/磨拋機(jī) 定時(shí)器/定時(shí)計(jì) 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 層析實(shí)驗(yàn)冷柜 玻璃反應(yīng)釜/真空恒溫反應(yīng)器

【石化儀器】石油產(chǎn)品閃點(diǎn)和燃點(diǎn)試驗(yàn)器 石油產(chǎn)品恩氏粘度計(jì) 石油產(chǎn)品密度試驗(yàn)器 銅片/銀片/潤(rùn)滑脂/液相腐蝕試驗(yàn)器 石油產(chǎn)品蒸餾(餾程)試驗(yàn)器 石油產(chǎn)品酸值/酸度試驗(yàn)器 石油產(chǎn)品灰分測(cè)定儀/色度測(cè)定儀 石油產(chǎn)品水分試驗(yàn)器 石油產(chǎn)品硫含量試驗(yàn)器 機(jī)械雜質(zhì)/殘留物/殘?zhí)?#47;沉淀物測(cè)定儀 石油產(chǎn)品運(yùn)動(dòng)粘度測(cè)定器 傾點(diǎn)/濁點(diǎn)/冰點(diǎn)/凝點(diǎn)/冷濾點(diǎn)試驗(yàn)器 抗泡沫特性/抗乳化性能試驗(yàn)器 潤(rùn)滑脂滴點(diǎn)試驗(yàn)器 飽和蒸汽壓試驗(yàn)器/實(shí)際膠質(zhì)試驗(yàn)器 原油中蠟含量測(cè)定儀 氧化安定性測(cè)定儀 潤(rùn)滑油蒸發(fā)損失測(cè)定儀 液體石油采樣器/取樣器 絕緣油耐壓測(cè)定儀 絕緣油體積電阻率測(cè)定儀 潤(rùn)滑油空氣釋放值測(cè)定儀 萘結(jié)晶點(diǎn)試驗(yàn)器/苯胺點(diǎn)試驗(yàn)器

【藥檢儀器】切片機(jī) 澄明度檢測(cè)儀 片劑多用測(cè)定儀(硬度.脆碎度.崩解度.溶出度) 藥物光照試驗(yàn)儀 制丸機(jī) 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查儀 藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀 藥物溶出度儀 片劑脆碎度測(cè)定儀 微機(jī)熱原測(cè)溫儀 崩解時(shí)限測(cè)定儀(崩解儀) 包衣機(jī)/小型包衣機(jī)

【涂料儀器】涂料比重杯 漆膜附著力試驗(yàn)儀/劃格試驗(yàn)儀 建筑涂料耐洗刷儀/磨耗儀 粒子細(xì)度試驗(yàn)儀(刮板細(xì)度計(jì)) 三輥機(jī)/平磨機(jī) 涂膜器/成膜器 干燥性能試驗(yàn)儀 柔韌性測(cè)試儀(杯突試驗(yàn)儀/彎曲試驗(yàn)儀/彈性試驗(yàn)器) 樣品雜質(zhì)分析儀 漆膜沖擊試驗(yàn)機(jī) 目視比色箱/鐵鉆比色計(jì)

四、MTT法測(cè)24孔板時(shí) 細(xì)胞數(shù)多 二甲基亞砜（DMSO）溶解甲瓚后溶液顏色深的孔 吸光度反而低

MTT原理

\x09MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,漢語(yǔ)化學(xué)名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名：噻唑藍(lán).是一種黃顏色的染料.

\x09MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法.其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能.二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量.在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比.該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等.它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì). 缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水,需被溶解后才能檢測(cè).這不僅使工作量增加,也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響,而且溶解甲的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害.

MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 濃度為5mg/ml.因此,可以稱取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸緩沖液（PBS）或無酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細(xì)菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的過程中,容器最好用鋁箔紙包住.實(shí)驗(yàn)的時(shí)候我一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來避光,覺得這樣比較好. 需要注意的是,MTT法只能用來檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力,但不能測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)數(shù).在用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候,為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范圍內(nèi).

\x09MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配,過濾后4ºC避光保存兩周內(nèi)有效,或配制成5mg/ml保存在-20度長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融,最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解.我一般都把MTT粉分裝在EP管里,用的時(shí)候現(xiàn)配,直接往培養(yǎng)板中加,沒必要一下子配那么多,尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就絕對(duì)不能再用了.

\x09MTT有致癌性,用的時(shí)候小心,有條件最好帶那種透明的簿膜手套.配成的MTT需要無菌,MTT對(duì)菌很敏感；往96孔板加時(shí)不避光也沒有關(guān)系,畢竟時(shí)間較短,或者你不放心的時(shí)候可以把操作臺(tái)上的照明燈關(guān)掉.

\x09配制MTT時(shí)用PBS（ph=7.4）溶解.PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g調(diào)pH 7.4,定容1L.

普通MTT法實(shí)驗(yàn)步驟：1：接種細(xì)胞：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液,以每孔1000-10000個(gè)細(xì)

\x09胞接種到96孔板,每孔體積200ul.2: 培養(yǎng)細(xì)胞：同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天（可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間）.3：呈色：培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT（噻唑藍(lán)）溶液（5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4 h,

\x09終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對(duì)于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液.

\x09每孔加150ul DMSO,振蕩10min,使結(jié)晶物充分融解.4：比色：選擇490nm波長(zhǎng),在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時(shí)間為

\x09橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線.

藥物MTT法實(shí)驗(yàn)步驟貼壁細(xì)胞：1: 收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度 1000-

\x0910000 孔,（邊緣孔用無菌PBS填充）.2: 5%CO2,37℃孵育,至細(xì)胞單層鋪滿孔底（96孔平底板）,加入濃度梯度的藥物,原則上,

\x09細(xì)胞貼壁后即可加藥,或兩小時(shí),或半天時(shí)間,但我們常在前一天下午鋪板,次日上午

\x09加藥.一般5-7個(gè)梯度,每孔100ul,設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔.建議設(shè)5個(gè),否則難以反應(yīng)真實(shí)情況3: 5%CO2,37℃孵育16-48小時(shí),倒置顯微鏡下觀察.4: 每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml,即0.5%MTT）,繼續(xù)培養(yǎng)4h.若藥物與MTT能夠反應(yīng),

\x09可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液.5: 終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液.6: 每孔加入150ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解.在酶聯(lián)免

\x09疫檢測(cè)儀OD490nm處測(cè)量各孔的吸光值.7: 同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜）,對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介

\x09質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）.

懸浮細(xì)胞：1: 收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度1×106/ml,按次序?qū)ⅱ傺a(bǔ)足的1640（無血清）培

養(yǎng)基40ul ；②加Actinomycin D（放線菌素D有毒性）10ul用培養(yǎng)液稀釋 (儲(chǔ)存液100g/ml,需預(yù)試尋找最佳稀釋度,1:10-1:20)；③需檢測(cè)物10ul；④細(xì)胞懸液50ul（即5×104cell/孔）,共100ul加入到96孔板（邊緣孔用無菌水填充）.每板設(shè)對(duì)照（加100l 1640）

2: 置37℃,5%CO2孵育16-48小時(shí),倒置顯微鏡下觀察.3: 每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml,即0.5%MTT）,繼續(xù)培養(yǎng)4 h.（懸浮細(xì)胞推薦使用

WST-1,培養(yǎng)4 h后可跳過步驟4）,直接酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570nm（630nm校準(zhǔn)）測(cè)量各孔的吸光值）

\x094、離心（1000轉(zhuǎn)x10min）,小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解.在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570nm（630nm校準(zhǔn)）測(cè)量各孔的吸光值.

\x095、同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜DMSO）,對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）,每組設(shè)定3復(fù)孔.

注意事項(xiàng)：(1) 選擇適當(dāng)?shù)眉?xì)胞接種濃度.(2) 避免血清干擾：一般選小于10％的胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行試驗(yàn).在呈色后盡量吸盡孔

\x09內(nèi)殘余培養(yǎng)液.(3) 設(shè)空白對(duì)照：與試驗(yàn)平行不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對(duì)照.其他試驗(yàn)步驟保持一致,

\x09最后比色以空白調(diào)零.

(4) MTT實(shí)驗(yàn)吸光度最后要在0-0.7之間,超出這個(gè)范圍就不是直線關(guān)系.

\x09(5) 用96孔板培養(yǎng)細(xì)胞做MTT測(cè)細(xì)胞活力,應(yīng)該加多少1640培養(yǎng)基,多少M(fèi)TT和DMSO合適

\x09根據(jù)書上說的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要盡量去掉培養(yǎng)液,便于

\x09DMSO溶解甲臜顆粒進(jìn)行比色測(cè)定

\x09(6) 一般每孔4000個(gè)細(xì)胞為宜,既細(xì)胞濃度在20000個(gè)/ml,MTT加20ul,作用四小時(shí)后洗掉上清液,注意不要將甲瓉洗掉,然后每孔加150ul DMSO,在脫色搖床上振蕩10分鐘,然后測(cè)吸光值.

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