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ASO寡核苷酸（ASO寡核苷酸探針）

發(fā)布時(shí)間：2023-04-14 02:15:41 稿源：創(chuàng)意嶺閱讀： 143

大家好！今天讓創(chuàng)意嶺的小編來(lái)大家介紹下關(guān)于ASO寡核苷酸的問(wèn)題，以下是小編對(duì)此問(wèn)題的歸納整理，讓我們一起來(lái)看看吧。

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本文目錄:

1、基因檢測(cè)方法有好幾種，哪一種方式比較好
2、什么是基因診斷?基因診斷有什么方式?
3、基因診斷常用技術(shù)方法
4、先說(shuō)謝謝!~~高中生物

ASO寡核苷酸（ASO寡核苷酸探針）

一、基因檢測(cè)方法有好幾種，哪一種方式比較好

需要按照實(shí)際需求去選擇，沒(méi)有哪個(gè)最好的說(shuō)法，合適的就是最好的

常用基因診斷技術(shù)：

一、Southern印跡法（Southern blot）

基本原理是：硝酸纖維膜或尼龍濾膜對(duì)單鏈DNA的吸附能力很強(qiáng)，當(dāng)電泳后凝膠經(jīng)過(guò)DNA變性處理，覆以上述濾膜，再于其上方壓上多層干燥的吸水紙，借助它對(duì)深鹽溶液的上吸作用，凝膠上的單鏈DNA將轉(zhuǎn)移到濾膜上。轉(zhuǎn)移是原位的，即DNA片段的位置保持不變。轉(zhuǎn)移結(jié)束后，經(jīng)過(guò)80℃烘烤的DNA，將原位地固定于膜上。

當(dāng)含有特定基因片段已原位轉(zhuǎn)移到膜上后，即可與同位素標(biāo)記了的探針進(jìn)行雜交，并將雜交的信號(hào)顯示出來(lái)。雜交通常在塑料袋中進(jìn)行，袋內(nèi)放置上述雜交濾膜，加入含有變性后探針的雜交溶液后，在一定溫度下讓單鏈探針DNA與固定于膜上的單鏈基因DNA分子按堿基到互補(bǔ)原理充分結(jié)合。結(jié)合是特異的，例如只有β珠蛋白基因DNA才能結(jié)合上β珠蛋白的探針。雜交后，洗去膜上的未組合的探針，將Ⅹ線膠片覆于膜上，在暗盒中日光進(jìn)行放射自顯影。結(jié)合了同位素標(biāo)記探針的DNA片段所在部位將顯示黑色的雜交帶，基因的缺失或突變則可能導(dǎo)致帶的缺失或位置改變。

二、聚合酶鏈反應(yīng)

近年來(lái)，基因分析和基因工程技術(shù)有了革命性的突破，這主要?dú)w功于聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）的發(fā)展和應(yīng)用。應(yīng)用PCR技術(shù)可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小時(shí)內(nèi)體外擴(kuò)增數(shù)十萬(wàn)至百萬(wàn)倍。擴(kuò)增的片段可以直接通過(guò)電泳觀察，也可用于進(jìn)一步的分析。這樣，少量的單拷貝基因不需通過(guò)同位素提高其敏感性來(lái)觀察，而通過(guò)擴(kuò)增至百萬(wàn)倍后直接觀察到，而且原先需要一、二周才能作出的診斷可以縮短至數(shù)小時(shí)。

三、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性

小衛(wèi)星DNA和微衛(wèi)星DNA的長(zhǎng)度多態(tài)性可以通過(guò)PCR擴(kuò)增后電泳來(lái)檢出，并用于致病基因的連鎖分析，這種診斷方法稱為擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP）連鎖分析法。PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物即等位片段之間的差別有時(shí)只有幾個(gè)核苷酸，故需用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離鑒定。此法多用于突變性質(zhì)不明的連鎖分析.

四、等位基因的特異寡核苷酸探針診斷法

當(dāng)基因的突變部位和性質(zhì)已完全明了時(shí)，可以合成等基因特異的寡核苷酸探針（allele-specific oligonucleotide,ASO）用同位素或非同位素標(biāo)記進(jìn)行診斷。探針通常為長(zhǎng)20bp左右的核苷酸。用于探測(cè)點(diǎn)突變時(shí)一般需要合成兩種探針，與正常基因序列完全一致，能與之穩(wěn)定地雜交，但不能與突變基因序列雜交；另一種與突變基因序列一致，能與突變基因序列穩(wěn)定雜交，但不能與正?；蛐蛄蟹€(wěn)定雜交，這樣，就可以把只有一個(gè)堿基發(fā)生了突變的基因區(qū)別開(kāi)來(lái).

PCR可結(jié)合ASO，即PCR－ASO技術(shù)，即先將含有突變點(diǎn)的基因有關(guān)片段進(jìn)行體外擴(kuò)增，然后再與ASO探針作點(diǎn)雜交，這樣大大簡(jiǎn)化了方法，節(jié)約了時(shí)間，而且只要極少量的基因組DNA就可進(jìn)行。

五、單鏈構(gòu)象多態(tài)性診斷法

單鏈構(gòu)象多態(tài)性（signle strand conformation polymorphism,SSCP）是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構(gòu)象差異，這種差異將造成相同或相近長(zhǎng)度的單鏈DNA電泳遷移率不同，從而可用于DNA中單個(gè)堿基的替代、微小的缺失或手稿的檢測(cè)。用SSCP法檢查基因突變時(shí)，通常在疑有突變的DNA片段附近設(shè)計(jì)一對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后將擴(kuò)增物用甲酰胺等變性，并在聚丙烯酰胺凝膠中電泳，突變所引起的DNA構(gòu)象差異將表現(xiàn)為電泳帶位置的差異，從而可據(jù)之作出診斷。

二、什么是基因診斷?基因診斷有什么方式?

基因診斷（gene diagnosis）是以探測(cè)基因的存在,分析基因的類型和缺陷及其表達(dá)功能是否正常,從而達(dá)到診斷疾病的一種方法.它是繼形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)診斷之后的第四代診斷技術(shù),它的誕生與發(fā)展得益于分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展.

常用基因診斷技術(shù)：

一、Southern印跡法（Southern blot）

基本原理是：硝酸纖維膜或尼龍濾膜對(duì)單鏈DNA的吸附能力很強(qiáng),當(dāng)電泳后凝膠經(jīng)過(guò)DNA變性處理,覆以上述濾膜,再于其上方壓上多層干燥的吸水紙,借助它對(duì)深鹽溶液的上吸作用,凝膠上的單鏈DNA將轉(zhuǎn)移到濾膜上.轉(zhuǎn)移是原位的,即DNA片段的位置保持不變.轉(zhuǎn)移結(jié)束后,經(jīng)過(guò)80℃烘烤的DNA,將原位地固定于膜上.

當(dāng)含有特定基因片段已原位轉(zhuǎn)移到膜上后,即可與同位素標(biāo)記了的探針進(jìn)行雜交,并將雜交的信號(hào)顯示出來(lái).雜交通常在塑料袋中進(jìn)行,袋內(nèi)放置上述雜交濾膜,加入含有變性后探針的雜交溶液后,在一定溫度下讓單鏈探針DNA與固定于膜上的單鏈基因DNA分子按堿基到互補(bǔ)原理充分結(jié)合.結(jié)合是特異的,例如只有β珠蛋白基因DNA才能結(jié)合上β珠蛋白的探針.雜交后,洗去膜上的未組合的探針,將Ⅹ線膠片覆于膜上,在暗盒中日光進(jìn)行放射自顯影.結(jié)合了同位素標(biāo)記探針的DNA片段所在部位將顯示黑色的雜交帶,基因的缺失或突變則可能導(dǎo)致帶的缺失或位置改變.

二、聚合酶鏈反應(yīng)

近年來(lái),基因分析和基因工程技術(shù)有了革命性的突破,這主要?dú)w功于聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）的發(fā)展和應(yīng)用.應(yīng)用PCR技術(shù)可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小時(shí)內(nèi)體外擴(kuò)增數(shù)十萬(wàn)至百萬(wàn)倍.擴(kuò)增的片段可以直接通過(guò)電泳觀察,也可用于進(jìn)一步的分析.這樣,少量的單拷貝基因不需通過(guò)同位素提高其敏感性來(lái)觀察,而通過(guò)擴(kuò)增至百萬(wàn)倍后直接觀察到,而且原先需要一、二周才能作出的診斷可以縮短至數(shù)小時(shí).

三、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性

小衛(wèi)星DNA和微衛(wèi)星DNA的長(zhǎng)度多態(tài)性可以通過(guò)PCR擴(kuò)增后電泳來(lái)檢出,并用于致病基因的連鎖分析,這種診斷方法稱為擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP）連鎖分析法.PCR擴(kuò)增后,產(chǎn)物即等位片段之間的差別有時(shí)只有幾個(gè)核苷酸,故需用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離鑒定.此法多用于突變性質(zhì)不明的連鎖分析.

四、等位基因的特異寡核苷酸探針診斷法

當(dāng)基因的突變部位和性質(zhì)已完全明了時(shí),可以合成等基因特異的寡核苷酸探針（allele-specific oligonucleotide,ASO）用同位素或非同位素標(biāo)記進(jìn)行診斷.探針通常為長(zhǎng)20bp左右的核苷酸.用于探測(cè)點(diǎn)突變時(shí)一般需要合成兩種探針,與正?；蛐蛄型耆恢?能與之穩(wěn)定地雜交,但不能與突變基因序列雜交；另一種與突變基因序列一致,能與突變基因序列穩(wěn)定雜交,但不能與正?；蛐蛄蟹€(wěn)定雜交,這樣,就可以把只有一個(gè)堿基發(fā)生了突變的基因區(qū)別開(kāi)來(lái).

PCR可結(jié)合ASO,即PCR－ASO技術(shù),即先將含有突變點(diǎn)的基因有關(guān)片段進(jìn)行體外擴(kuò)增,然后再與ASO探針作點(diǎn)雜交,這樣大大簡(jiǎn)化了方法,節(jié)約了時(shí)間,而且只要極少量的基因組DNA就可進(jìn)行.

五、單鏈構(gòu)象多態(tài)性診斷法

單鏈構(gòu)象多態(tài)性（signle strand conformation polymorphism,SSCP）是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構(gòu)象差異,這種差異將造成相同或相近長(zhǎng)度的單鏈DNA電泳遷移率不同,從而可用于DNA中單個(gè)堿基的替代、微小的缺失或手稿的檢測(cè).用SSCP法檢查基因突變時(shí),通常在疑有突變的DNA片段附近設(shè)計(jì)一對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后將擴(kuò)增物用甲酰胺等變性,并在聚丙烯酰胺凝膠中電泳,突變所引起的DNA構(gòu)象差異將表現(xiàn)為電泳帶位置的差異,從而可據(jù)之作出診斷.

三、基因診斷常用技術(shù)方法

基因診斷（gene diagnosis）是以探測(cè)基因的存在，分析基因的類型和缺陷及其表達(dá)功能是否正常，從而達(dá)到診斷疾病的一種方法。它是繼形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)診斷之后的第四代診斷技術(shù)，它的誕生與發(fā)展得益于分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展。

常用基因診斷技術(shù)：

一、Southern印跡法（Southern blot）

二、聚合酶鏈反應(yīng)

三、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性

四、等位基因的特異寡核苷酸探針診斷法

當(dāng)基因的突變部位和性質(zhì)已完全明了時(shí)，可以合成等基因特異的寡核苷酸探針（allele-specific oligonucleotide,ASO）用同位素或非同位素標(biāo)記進(jìn)行診斷。探針通常為長(zhǎng)20bp左右的核苷酸。用于探測(cè)點(diǎn)突變時(shí)一般需要合成兩種探針，與正?；蛐蛄型耆恢拢芘c之穩(wěn)定地雜交，但不能與突變基因序列雜交；另一種與突變基因序列一致，能與突變基因序列穩(wěn)定雜交，但不能與正?；蛐蛄蟹€(wěn)定雜交，這樣，就可以把只有一個(gè)堿基發(fā)生了突變的基因區(qū)別開(kāi)來(lái).

五、單鏈構(gòu)象多態(tài)性診斷法

四、先說(shuō)謝謝!~~高中生物

常用基因診斷技術(shù)：

一、Southern印跡法（Southern blot）

二、聚合酶鏈反應(yīng)

三、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性

四、等位基因的特異寡核苷酸探針診斷法

五、單鏈構(gòu)象多態(tài)性診斷法

參考資料：http://www.39kf.com/cooperate/book/05/16/2006-01-13-163827.shtml

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